In 1985 nam Gonny Koster het initiatief een 4-stemmig a-capella barbershopkoor te starten in Hendrik Ido Ambacht. De vereniging krijgt de naam "Barbershop Harmony Singers".

In 1988 zocht de vereniging aansluiting bij Sweet Adelines International, een internationaal opererende barbershop organisatie, met de hoofdvestiging in Amerika. Er moest een nieuwe naam gekozen worden: "ROUTE SIXTEEN" (ontleend aan de ligging van Hendrik Ido Ambacht aan de A16). In 1988 wordt Liesbeth van Wijngaarden dirigent van het koor.

In 2007 verhuisde het koor naar Dordrecht. Het repertoire werd langzamerhand uitgebreid en werd een mix van Barbershop, jazzy songs, close harmony en Nederlandstalig.

In 2011 heeft Route Sixteen zich definitief aangesloten bij de Nederlandse barbershoporganisatie Holland Harmony. Hierdoor wordt de kwaliteit gewaarborgd, het koor kan aanspraak maken op vele coaches, deelnemen aan werkweekenden en tijdens conventies kan het koor zich meten aan de andere barbershopkoren.

In 2014 wordt Marlous Luiten de nieuwe dirigent. Marlous heeft ruim 10 jaar ervaring als professioneel zangeres, actrice en theatermaker in de cabaret groep Femmage. Inmiddels zingen we niet enkel barbershopnummers, maar ook close harmony.